無敵のバイオテクニカルシリーズ
改訂 PCR実験ノート
みるみる増やすコツとPCR産物の多彩な活用法
- 定価 3,300円＋税
- 2005年10月 発行
- A4判
- 179ページ
- ISBN 978-4-89706-921-0
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誰もがPCRを使う時代だからこそ，誰よりも確かな技術を押さえたい！新たにリアルタイムPCR，ChIP assay…といった応用的なPCR技術を多数追加．確かに使える，さらに進んだ改訂版！
内容見本
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第1章 PCRの基礎知識
1 PCRの原理【谷口武利】
- 酵素
- 反応サイクル
- 検出感度
- 反応温度
2 PCRを行うための準備【森澤啓子】
- 装置
- 器具
- 試薬
- PCRを行うのに必要な基礎知識
- 試料の保存法
- 基本操作
第2章 PCRの実践マニュアル【森澤啓子】
1 DNAの調製
2 DNA，プライマーの定量
- １）DNA，RNA定量
- ２）DNA，RNAの濃度
- ３）プライマーの濃度
3 反応液の準備
4 反応条件の設定
5 反応産物の分析（電気泳動）
第3章 塩基配列を決定する【森澤啓子】
シークエンスにかかわるトラブルシューティング
第4章 遺伝子発現を測定する
はじめに【谷口武利】
1 RT-PCR法【森澤啓子】
- はじめに−PCRを用いた遺伝子発現測定について
- RT-PCR法とは—原理から
- RNAの抽出
- 逆転写反応
- RT-PCR反応と結果の分析
2 リアルタイム（real-time）PCR【森澤啓子】
- リアルタイムPCRの検出法
- リアルタイムPCRの使用法（サイバーグリーン使用の場合）
3 発現遺伝子の違いを探す—DNAマイクロアレイ：レーザー顕微切断法による癌組織，正常組織を用いて【蘆田真吾／執印太郎】
- 実験法の概略
- サンプルの調製
- T7-based RNA増幅法
- ハイブリダイゼーション
- データ解析と役立つWeb Site
4 ヒストン修飾状態を利用して遺伝子の発現調節領域を解析する【坂本修士／玉置信行／縣 保年】
- ChIP assayの目的，概略
- ChIP assayの原理
- ChIP assayのプロトコール
第5章 遺伝子を検索する
はじめに【谷口武利】
1 既知遺伝子を検索する【森澤啓子】
2 未知遺伝子を検索する
- ESTを用いて未知cDNA配列を検索する【大野芳典】
- 他種の既知類似遺伝子を用いて未知cDNA配列を検索する【大野芳典】
- 目的遺伝子の調節領域を検索する【大野芳典】
- タンパク質の構造解析からのcDNAクローニング【小西裕子】
第6章 PCR産物のダイレクトクローニング【谷口武利】
はじめに
1 PCR産物のダイレクトクローニング
- PCR産物の精製
- TAクローニング
- 平滑化クローニング
- 制限酵素サイトを用いたサブクローニング
2 コロニーPCR
3 便利なクローニングシステム
第7章 PCR産物を用いた実験法
はじめに【谷口武利】
1 プローブとしての利用【谷口武利】
2 in vitro翻訳系でのmRNAとしての利用【谷口武利】
3 融合タンパク質への応用【谷口武利】
- 細菌系での調製
- 昆虫細胞，培養細胞系での調製
- in vitro翻訳系での調製
4 遺伝子を発現させ機能を調べる【谷口武利】
- 発現プラスミド，レポーター遺伝子の構築
- 細胞への遺伝子導入法
5 PCRを用いた簡単な変異導入法【足立貴世美】
第8章 染色体顕微切断・PCR・FISH法による未知癌遺伝子の探索【田口尚弘】
- 顕微切断法（マイクロダイセクション）とは
- 顕微切断法の原理
- 具体的応用例
第9章 遺伝子多型（SNP）の解析【秋丸国広／中村裕之／執印太郎】
- SNPとは
- SNPの検出法—PCR-SSCP法
- SNPと疾患—リンクサイト
第10章 PCRを用いた個人識別【中西祥徳／橋本良明】
- 個人識別
- 実践方法—PCR-RFLP法によるABO式遺伝子型検出
- 個人識別事例
- まとめ
《付録 PCRのコツとトラブルシューティング》【森澤啓子／坂本修士／玉置信行／縣 保年／小西裕子】
- 学生時代、PCRをはじめた頃にとても参考になった。
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