実験法Q&Aシリーズ:バイオ実験トラブル解決超基本Q&A
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実験法Q&Aシリーズ

バイオ実験トラブル解決超基本Q&A

  • 大藤道衛/著
  • 2002年03月20日発行
  • A5判
  • 247ページ
  • ISBN 978-4-89706-276-1
  • 定価:4,180円(本体3,800円+税)
  • 在庫:あり
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Q&Aシリーズ第二弾はバイオ実験のトラブル解決110番です.トラブルをどのように解決したらよいかを,Q&A方式で具体例を挙げて解説.「なぜ失敗したのだろう?」「どうやって解決したらいいの?」そんなとっさの事態にお答えします!

目次

第1章 トラブル突破とトラブルを起こりにくくする定石

1.バイオ実験トラブル突破の方法とは何でしょうか?

  • トラブルを起こす
  • コントロールを探す
  • プロトコールに忠実か
  • 先入観の排除
  • サンプルの確認
  • 撹拌,混合

2.トラブルを起こりにくくする方法は何でしょうか?

  • 実験の原理を知る,試薬/検体の特徴を知る
  • コントロールの設定
  • 実験の重複
  • プロトコールの作製
  • 機器のブラックボックス
  • Cold Run
  • コンタミ
  • 「精」と「粗」
  • サンプル管理
  • 事例を記録

第2章 トラブル解決Q&A Case

Case1 クローン化したDNAからサブクローンを取る(サブクローニング)

  • プラスミドの入った大腸菌を入手し培養したのですが,菌が生えてきませんでした.どうしてでしょうか?
  • 入手したプラスミドをマップに従い制限酵素(BamH?)で消化したのですが,インサート内部で切れませんでした.どうしてでしょうか?
  • プラスミドを制限酵素で消化したのですが,制限酵素地図よりも切断箇所が多かったです.どうしてでしょうか?
  • 異なる2つの制限酵素で一緒に消化すると切れないのですが,どうしてでしょうか?
  • その他,15項目

Case2 PCRによるDNA配列の変異解析とシークエンシング

  • いくつかの組織から抽出したゲノムDNAを制限酵素(BamH?)処理またはテンプレートとしてPCR実験に用いたのですが,切れなかったり増えない検体があります.どうしてでしょうか?
  • 多型解析を行うためいろいろな組織から抽出したゲノムDNAを電気泳動で調べたところ,スメアー状のものがありました.壊れているようですが,使用できるのでしょうか?
  • ホルマリン固定・パラフィン包埋切片サンプルからPCRで増幅したのですが,バラツキが大きいです.どうしたらよいでしょうか?
  • アガロースゲル電気泳動でPCR産物(約300bp)を分析したのですが,バンドがBPB色素とほとんど同じ位置に出てきて分析できません.どうしたらよいでしょうか?
  • アガロースゲル電気泳動でゲルにEtBrを加えて染色したところ,一部のDNAバンドが見えなくなっていることがあります.どうしてでしょうか?
  • その他,15項目

Case3 ノーザンハイブリダイゼーションによる遺伝子発現の検出

  • 組織から全RNAを抽出したのですが,電気泳動の結果,壊れていました.どのステップが問題でしょうか?
  • 非放射性ハイブリダイゼーションを行ってRNAの特異的定量を試みましたが,定量領域が狭くうまくいきませんでした.どうしてでしょうか?
  • ハイブリダイゼーションを行ったところ,斑ができて肝心なバンドが見えなくなってしまいました.どうしたらよいでしょうか?
  • RT-PCRでは増幅するのですが,ノーザンブロット法では検出できません.どうしたらよいでしょうか?

Case4 カラムクロマトグラフィーによるタンパク質の精製

  • 大腸菌で発現させた組換えタンパク質を精製したのですが,ほとんど取れていませんでした.どうしたらよいでしょうか?
  • 透析膜を用いた透析や濃縮の前後でタンパク質量を測定し回収率を出したのですが,回収率が80%を切ることがあります.タンパク質の性質によるのでしょうか?
  • 酵素タンパク質を硫安分画したところ,酵素活性が下がってしまいました.どうしてでしょうか?
  • ゲル濾過クロマトグラフィーで精製を行ったところ,タンパク質の回収量がよくありません.どうしてでしょうか?
  • その他,5項目

Case5 イムノブロッティングによるタンパク質の特異的な検出

  • ハプテン抗原をキャリアータンパク質に結合させて免疫したのですが抗体ができませんでした.どうしたらよいでしょうか?
  • ポリクローナル抗体を作製しようとタンパク質抗原を免疫していますが,抗体値が上がりません.どうしてでしょうか?
  • 保存中に抗体活性が下がっているような気がします.どうしたらよいでしょうか?
  • イムノブロッティングで,バックグラウンドが高くてバンドがハッキリ見えません,どうしたらよいでしょうか?
  • その他,2項目

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  • 【本書名】実験法Q&Aシリーズ:バイオ実験トラブル解決超基本Q&A
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