無敵のバイオテクニカルシリーズ:改訂 PCR実験ノート〜みるみる増やすコツとPCR産物の多彩な活用法
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無敵のバイオテクニカルシリーズ

改訂 PCR実験ノート

みるみる増やすコツとPCR産物の多彩な活用法

  • 谷口武利/編
  • 2005年10月20日発行
  • A4判
  • 179ページ
  • ISBN 978-4-89706-921-0
  • 定価:3,300円+税
  • 注文不可
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誰もがPCRを使う時代だからこそ,誰よりも確かな技術を押さえたい!新たにリアルタイムPCR,ChIP assay…といった応用的なPCR技術を多数追加.確かに使える,さらに進んだ改訂版!

目次

第1章 PCRの基礎知識

1 PCRの原理【谷口武利】

  • 酵素
  • 反応サイクル
  • 検出感度
  • 反応温度

2 PCRを行うための準備【森澤啓子】

  • 装置
  • 器具
  • 試薬
  • PCRを行うのに必要な基礎知識
  • 試料の保存法
  • 基本操作

第2章 PCRの実践マニュアル【森澤啓子】

1 DNAの調製

2 DNA,プライマーの定量

  • 1)DNA,RNA定量
  • 2)DNA,RNAの濃度
  • 3)プライマーの濃度

3 反応液の準備

4 反応条件の設定

5 反応産物の分析(電気泳動)

第3章 塩基配列を決定する【森澤啓子】

シークエンスにかかわるトラブルシューティング

第4章 遺伝子発現を測定する

はじめに【谷口武利】

1 RT-PCR法【森澤啓子】

  • はじめに−PCRを用いた遺伝子発現測定について
  • RT-PCR法とは—原理から
  • RNAの抽出
  • 逆転写反応
  • RT-PCR反応と結果の分析

2 リアルタイム(real-time)PCR【森澤啓子】

  • リアルタイムPCRの検出法
  • リアルタイムPCRの使用法(サイバーグリーン使用の場合)

3 発現遺伝子の違いを探す—DNAマイクロアレイ:レーザー顕微切断法による癌組織,正常組織を用いて【蘆田真吾/執印太郎】

  • 実験法の概略
  • サンプルの調製
  • T7-based RNA増幅法
  • ハイブリダイゼーション
  • データ解析と役立つWeb Site

4 ヒストン修飾状態を利用して遺伝子の発現調節領域を解析する【坂本修士/玉置信行/縣 保年】

  • ChIP assayの目的,概略
  • ChIP assayの原理
  • ChIP assayのプロトコール

第5章 遺伝子を検索する

はじめに【谷口武利】

1 既知遺伝子を検索する【森澤啓子】

2 未知遺伝子を検索する

  • ESTを用いて未知cDNA配列を検索する【大野芳典】
  • 他種の既知類似遺伝子を用いて未知cDNA配列を検索する【大野芳典】
  • 目的遺伝子の調節領域を検索する【大野芳典】
  • タンパク質の構造解析からのcDNAクローニング【小西裕子】

第6章 PCR産物のダイレクトクローニング【谷口武利】

はじめに

1 PCR産物のダイレクトクローニング

  • PCR産物の精製
  • TAクローニング
  • 平滑化クローニング
  • 制限酵素サイトを用いたサブクローニング

2 コロニーPCR

3 便利なクローニングシステム

第7章 PCR産物を用いた実験法

はじめに【谷口武利】

1 プローブとしての利用【谷口武利】

2 in vitro翻訳系でのmRNAとしての利用【谷口武利】

3 融合タンパク質への応用【谷口武利】

  • 細菌系での調製
  • 昆虫細胞,培養細胞系での調製
  • in vitro翻訳系での調製

4 遺伝子を発現させ機能を調べる【谷口武利】

  • 発現プラスミド,レポーター遺伝子の構築
  • 細胞への遺伝子導入法

5 PCRを用いた簡単な変異導入法【足立貴世美】

第8章 染色体顕微切断・PCR・FISH法による未知癌遺伝子の探索【田口尚弘】

  • 顕微切断法(マイクロダイセクション)とは
  • 顕微切断法の原理
  • 具体的応用例

第9章 遺伝子多型(SNP)の解析【秋丸国広/中村裕之/執印太郎】

  • SNPとは
  • SNPの検出法—PCR-SSCP法
  • SNPと疾患—リンクサイト

第10章 PCRを用いた個人識別【中西祥徳/橋本良明】

  • 個人識別
  • 実践方法—PCR-RFLP法によるABO式遺伝子型検出
  • 個人識別事例
  • まとめ

《付録 PCRのコツとトラブルシューティング》【森澤啓子/坂本修士/玉置信行/縣 保年/小西裕子】

書評・感想
  • 学生時代、PCRをはじめた頃にとても参考になった。

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  • 【本書名】無敵のバイオテクニカルシリーズ:改訂 PCR実験ノート〜みるみる増やすコツとPCR産物の多彩な活用法
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