Smart Lab Life

クリスティーンは今日，ウラノ研でマウスの世話をしているテクニシャンのエイミーと会うつもりである．クリスティーンはERAP（endoplasmic reticulum apoptotic protein）ノックアウトマウスから膵島を単離したいと考えている．クリスティーンはERストレス下のβ細胞においてERAPがアポトーシス促進性の要素であるか確かめたく思っている．そのために，彼女はコントロールとERAPノックアウトのマウスから単離した膵島での実験に熱心である．エイミーは快調にこの実験を進め，手技を実演してみせるつもりだ．エイミーはすでにせっせと働き，クリスティーンはちょうど現れ合流したばかりである．

クリスティーン調子はどうですか，エイミー？　マウスの膵島を単離する方法を懇切丁寧に指導するため時間をとってくれてありがとう．

エイミーいいんですよ．あなたの面倒をみるのも私の手技をお見せできるのも嬉しいです．

クリスティーンそれでははじめていただけるようですね．これまでのところ何をされたか，教えていただけますか？

エイミーもちろんです．ERAPノックアウトマウスを取り出し，単離しやすくするために顔を私の方へ向けさせながら，ピンで体を留めました．

クリスティーンちょっと質問ですが，このマウスは生まれてどのくらいでしたか？

エイミー３カ月です．では，話を元に戻しましょう．次にマウスの体の両側を取り巻く皮膚と筋肉を切開する必要があります．さて，胆管が見つかるように肝臓を除きます．そしてコラゲナーゼ溶液をゆっくり胆管へ注入します．膵臓を単離し，50 mLのコニカルチューブに入れて氷上に置きます．37℃で40分間分解させます．その後，顕微鏡下で膵島を分離しましょう．

クリスティーンこの膵島を培養する方法を伺ってもよろしいですか？

エイミーもちろんです．見て学びましょう．まず，マトリゲルでコートしたプレートを氷上に準備します．マトリゲルが固くなるのを防ぐため，５mLのRPMI培地をプレートに加えます．膵島を遠心し，上清を除いて，培地に再懸濁してから膵島をプレートに乗せます．数時間かけて，膵島をプレートに接着させます．

クリスティーン本当にありがとうエイミー．あなたの方法は私にとって新しい情報です．

エイミーそうですね．この膵島で何をしようと考えていますか？

クリスティーンできればコントロールとERAPノックアウトの膵島を２プレートずつ用意したいと思います．次にそれぞれ１プレートをアポトーシスを誘導するようなERストレス条件で処理したいと思います．最後に，膵島からタンパク質を単離し，切断型caspase-3を検出するためにウエスタンブロットをできればいいなと考えています．

エイミー最高にうまくいったら，何が観察できるのですか？

クリスティーンERストレス下のERAPノックアウト膵島のサンプルで，切断型caspase-3の現象が見られればいいなと期待しています．そのような結果が出れば，私がERAPをノックダウンしたβ細胞株で得た結果が確かめられます．切断型caspase-3量の減少は，ERAPがERストレス下でアポトーシス促進性に働くことを示唆するのです．

エイミー膵島で行う可能性があるアッセイは他にありますか？

クリスティーンTUNEL染色によるアポトーシスの測定も検討しています．RNAを単離して特定遺伝子の発現レベルも測定できればいいなと思います．

エイミー一般にマウスを使って他の実験をする予定はありますか？

クリスティーンはい．ERAPノックアウトマウスとAkitaマウスをかけあわせてみたいと思います．Akitaマウスは変異型の折り畳み不全なインスリンを発現し，それはERに蓄積してβ細胞死を引き起こします．ですから，Akitaマウスは糖尿病を発症します．理論上，ERAPノックアウトマウスとAkitaマウスの掛け合わせにより，糖尿病の症候は予防，もしくは改善されるはずです．

エイミーすばらしい計画ですね．もっと実験ができるように，ERAPノックアウトマウスとAkitaマウスを増やしておきますね．

クリスティーン後について勉強させていただいて，また膵島の単離方法を教えていただいて，ありがとうございました．

エイミーどういたしまして．今後のマウス実験の計画については逐次報告してくださいね．

クリスティーンもちろん，そうします．