実験医学別冊 目的別で選べるシリーズ:目的別で選べる遺伝子導入プロトコール〜発現解析とRNAi実験がこの1冊で自由自在!最高水準の結果を出すための実験テクニック
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実験医学別冊 目的別で選べるシリーズ

目的別で選べる遺伝子導入プロトコール

発現解析とRNAi実験がこの1冊で自由自在!最高水準の結果を出すための実験テクニック

  • 仲嶋一範,北村義浩,武内恒成/編
  • 定価 5,200円+税
  • 2012年07月発行
  • B5判
  • 252ページ
  • ISBN 978-4-7581-0184-4
  • 販売状況: 注文可能(在庫あり)
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発現解析、ノックダウン、遺伝子導入...タンパク質の機能解析に至る具体的方法・手技を徹底解説。各方法の比較だけでなく、実験のプロによるコツ、さらには実験デザインまで。実験の見通しがグンとよくなる!

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目次

1章 発現戦略

1 機能を調べるための実験デザイン【北村義浩】
2 各種蛍光タンパク質の使い分け【三輪佳宏】

2章 発現と機能の抑制戦略

1 遺伝子抑制解析の動向と戦略【武内恒成/河㟢麻実】
2 遺伝子抑制法の種類とメカニズム【萩原啓太郎/落谷孝広】

3 章 RNAi 実験の準備と実践

1 RNAi の原理【程久美子/北條浩彦】
2 siRNA デザインの方法と検索ウェブサイト【程久美子】
3 修飾基のついたsiRNA のRNAi 効果とその選択【西賢二/高橋朋子/長沢達矢/程久美子】
4 siRNA,dsRNA の取扱いと導入の基本【北條浩彦】
5 shRNA 発現ベクターの構築と導入の基本【松下夏樹】

4章 遺伝子導入実験プロトコール

【DNA,RNA を導入する】

1 リポフェクション法【内野慧太/落谷孝広】
2 エレクトロポレーション法による細胞・組織への導入
  • 培養細胞へのNEPA21 を用いた遺伝子導入【舛廣善和/小島裕久】
  • 培養細胞へのGene Pulser MXcell を用いた遺伝子導入【藤木亮次】
  • 電気パルスを用いた筋肉への遺伝子導入【宮崎純一/宮崎早月】
  • ニワトリ胚への遺伝子強制発現およびノックダウン【仲村春和】
3 エレクトロポレーション法による神経細胞への導入
  • 子宮内胎仔脳への遺伝子導入【田畑秀典/久保健一郎/仲嶋一範】
  • 網膜への遺伝子導入【松田孝彦】
  • 培養皿上の成熟神経細胞への遺伝子導入【田谷真一郎/星野幹雄】
  • 分散した神経細胞へのキュベット電極を用いた遺伝子導入【楠澤さやか/仲嶋一範】
  • 脳スライス培養への遺伝子導入【石田綾/岡部繁男】
4 超音波遺伝子導入法【立花克郎】
5 レーザー熱膨張式微量インジェクターを用いた試料導入【筒井大貴/東山哲也】
6 アテロコラーゲンを用いた生体siRNA デリバリー法【竹下文隆/落谷孝広】
7 コレステロールを用いた生体内でのsiRNA デリバリー法【桑原宏哉/仁科一隆/横田隆徳】

【ウイルスベクターを導入する】

8 ウイルスベクターの特徴と原理,製品など【北村義浩】
9 レトロウイルスベクターによる高効率遺伝子導入法【北村俊雄/高橋まり子】
10 レンチウイルスベクター【北村義浩】
11 E1 欠損型アデノウイルスベクター【三谷幸之介】

【タンパク質を導入する】

12 タンパク質直接細胞内導入法【道上宏之/松井秀樹】

5章 遺伝子導入実験におけるカルタヘナ法および関連法令

1 カルタヘナ法【三浦竜一】
2 関連法令【三浦竜一】
付録・Tag 抗体リスト【仲嶋一範/北村義浩/武内恒成】

Column

1 遺伝子抑制法(RNAi 法)の発展のために【武内恒成】

2 RNAi による治療への試み【桑原宏哉/仁科一隆/横田隆徳】

3 shRNA ライブラリースクリーニング【恵口 豊】

4 ケージドDNA/RNA を用いる遺伝子発現の光制御【古田寿昭】

5 トランスポゼースを用いた遺伝子発現【高橋淑子】

6 針電極を使った視床への導入法と,そのエッセンス【下郡智美/松居亜寿香】

ONEPOINT

  • 遺伝子銃
  • ノックダウンとノックアウトの違い
  • 長鎖dsRNA でもRNAi を観察(誘導)できる哺乳動物細胞
  • 配列選択のルール
  • トランスフェクション効率の影響
  • サイドエフェクトと発現リーク
  • 超音波の基本知識
  • コレステロール結合siRNAの細胞内でのプロセシング
  • 抽出したHDL の特性の確認
  • レトロウイルスゲノムのスプライシング
  • HIV ベクターの実験分類
  • mock infection
  • 濃縮法
  • コンフルエンシーと過増殖
  • アデノウイルス使用実験の一般的な注意点
  • ベクターの力価の確認方法

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