実験法Q&Aシリーズ:遺伝子導入なるほどQ&A〜実験のコツがつかめる基礎知識+siRNA・タンパク質の導入もわかる!
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実験法Q&Aシリーズ

遺伝子導入なるほどQ&A

実験のコツがつかめる基礎知識+siRNA・タンパク質の導入もわかる!

  • 落谷孝広,青木一教/編
  • 2005年05月31日発行
  • B5判
  • 232ページ
  • ISBN 978-4-89706-481-9
  • 定価:4,620円(本体4,200円+税)
  • 注文不可
    在庫:なし

遺伝子導入なしでは研究が進まない…でもいつも失敗してしまう! うまくいかない理由がわからない!など,どんどん遺伝子導入のふかみにはまっていく方は必読!遺伝子の細胞への入り方や導入・発現効率を上げる方法など知っておきたい基礎知識に加え,実は細胞のコンディションが結果を左右していた!など実験の失敗を回避する操作上のコツやトラブルへの対処法が満載.また,動物個体への遺伝子導入も解説されています.そして一番の特長が巻末付録の『遺伝子導入試薬の性能別比較一覧』です.たくさんある導入試薬の中から自分にぴったりのものが一目で選べる一覧表や自分が使用する細胞(株)名から導入実績のある試薬がわかる索引があり,初心者からベテランまでみんなに役立つ1冊です.

目次

1章 これだけは知っておきたい遺伝子導入の基礎知識【落谷孝広】

1 遺伝子導入はなぜ必要なのですか?

2 遺伝子導入の歴史を教えてください

3 遺伝子導入にはどのような方法がありますか?

4 遺伝子導入方法の使い分けを教えてください

5 遺伝子はどのように細胞内に入るのですか?

6 導入された遺伝子はどうなっていくのですか?

7 遺伝子導入を行うにはどのような設備,器具があればよいですか?

8 遺伝子導入の実験を計画する場合の注意点は何ですか?

2章 導入する遺伝子に関するQ&A【落谷孝広】

9 導入する遺伝子にはどの程度のクオリティーが要求されますか?

10 遺伝子導入用のDNAを溶解するバッファーは何がよいですか?

11 導入する遺伝子の形状や大きさに制限はありますか?

12 どのような種類の発現ベクターがありますか?

13 発現ベクターの使い分けと選ぶ際の注意点を教えてください

3章 遺伝子導入される細胞・動物個体に関するQ&A【落谷孝広】

14 遺伝子導入に用いる細胞はどうやって選べばよいのですか?

15 細胞株と初代培養細胞とでは遺伝子導入に違いがありますか?

16 浮遊細胞にも遺伝子導入は可能ですか?

17 遺伝子導入のためのベストの細胞とは,どのような状態でしょうか?

18 培養液の組成は遺伝子導入に影響しますか?

19 遺伝子導入した細胞はどのように廃棄したらよいのですか?

20 マウスなどの動物の体内に遺伝子導入するために適した方法は何ですか?

21 マウスの胎仔に遺伝子導入できますか?

4章 物理化学的な遺伝子導入方法のQ&A【落谷孝広】

22 自分の実験に合った遺伝子導入試薬(リポソーム)を選ぶにはどうしたらよいですか?

23 遺伝子導入の際の細胞数とDNA濃度はどのような関係にあればよいのでしょうか?

24 遺伝子導入・発現効率を上げるにはどうすればよいですか?

25 動物への物理的な遺伝子導入方法にはどのようなものがありますか?

5章 ウイルスベクターによる遺伝子導入のQ&A【青木一教】

●ウイルスベクターの基礎知識

  • 26 ウイルスベクターは物理化学的な遺伝子導入法とどこが違い,どのようなものがありますか?
  • 27 どのようなときにどのウイルスベクターを使ったらよいですか?

●実験の準備

  • 28 ウイルスベクターの実験をはじめる前に準備することは何ですか?
  • 29 ウイルスベクター実験を行う手続きについて教えてください
  • 30 ウイルスベクター実験の申請について教えてください
  • 31 ウイルスベクターを扱うにはどのような実験室が必要ですか?
  • 32 ウイルスベクターの実験をするときの服装はどうすればよいですか?
  • 33 インキュベーターや安全キャビネットの使い方を教えてください
  • 34 使ったピペットやチップはどうやって捨てるのですか?

●実験手技

  • 35 ウイルスベクターはどのように入手すればよいのですか? また,入手したらまずどうしたらよいですか?
  • 36 ウイルスベクターはどのように保存しておくのですか? また,どのくらい保存できるのですか?
  • 37 ウイルスベクターはどのように細胞に感染させるのですか?
  • 38 実験中にウイルス液が手についたらどうしたらよいでしょうか?
  • 39 ウイルスベクターは動物個体にも使えるのですか?

●トラブル

  • 40 レトロウイルスベクターでうまく遺伝子導入できない! どうしたらよいですか?
  • 41 アデノウイルスベクターでうまく遺伝子導入できない! どうしたらよいですか?
  • 42 別のアデノウイルスベクターがコンタミしているみたいですが,どうすればよいですか?
  • 43 自己増殖型ウイルスベクターが混入してくることはありますか?

6章 siRNAの導入に関するQ&A【竹下文隆】

  • 44 RNAiのメカニズムを教えてください
  • 45 siRNAの配列はどのように設計するのですか?
  • 46 siRNAをできるだけ高頻度で細胞に導入したい! それにはどうすればよいですか?
  • 47 合成siRNAとベクターによるsiRNAの導入は,どのように使い分けたらよいでしょうか?
  • 48 siRNAの導入効率,抑制効果を評価する方法を教えてください
  • 49 siRNAの導入の際の正しいコントロールは何ですか?
  • 50 修飾siRNAはどのような目的で使うのですか?
  • 51 マウスなどの動物の体内にsiRNAを導入するにはどうしたらよいですか?

7章 タンパク質・ペプチドの導入に関するQ&A【本間紀美】

  • 52 タンパク質の導入はどのような研究に向いているのですか?
  • 53 どのような細胞にタンパク質を導入できますか?
  • 54 タンパク質を培養細胞に導入できますか?
  • 55 どのようなタンパク質を導入できるのですか?
  • 56 どの程度のタンパク質のクオリティーが導入に要求されますか?
  • 57 タンパク質導入試薬にはどのようなものがありますか?
  • 58 タンパク質導入方法のポイントを教えてください
  • 59 タンパク質導入効率を上げるにはどうすればよいでしょうか?

8章 発現解析に関するQ&A【本間紀美/落谷孝広】

  • 60 遺伝子導入による機能解析はどのような点に注意して進めればよいですか?
  • 61 遺伝子の発現を解析するにはどうすればよいですか?
  • 62 遺伝子導入後にタンパク質の発現を解析するにはどうすればよいですか?
  • 63 動物個体に導入された遺伝子の発現解析の方法を教えてください
  • 64 レポーターアッセイにはどのようなものがありますか?
  • 65 導入した遺伝子の機能を調べるにはどうすればよいですか?
  • 66 たくさんの遺伝子を細胞に導入して,特定の機能を調べるにはどうすればよいですか?

9章 トラブルシューティング− こんなときどうすればいいの?

遺伝子導入試薬によるトラブルシューティング【落谷孝広】

  • 遺伝子導入の効率が悪い
  • 細胞が死んでしまう
  • DNAを混ぜたら沈殿ができてしまった
  • 遺伝子の発現期間が短い
  • 遺伝子導入効果が実験ごとに大きく異なる
  • 薬剤選択したクローンなのに遺伝子が発現していない
  • G418(geneticin)の薬剤選択でコロニーができてこない
  • 目的遺伝子と薬剤耐性遺伝子のコトランスフェクションがうまくいかない

動物への遺伝子導入に関するトラブルシューティング【落谷孝広】

  • 動物に遺伝子を投与しても発現しない
  • 動物に遺伝子導入したら,元気がない

ウイルスベクターに関するトラブルシューティング【青木一教】

  • レトロウイルスベクターでうまく遺伝子導入できない
  • アデノウイルスベクターでうまく遺伝子導入できない
  • 別のアデノウイルスベクターがコンタミしているみたい
  • 自己増殖型ウイルスベクターが混入してくる

siRNAに関するトラブルシューティング【竹下文隆】

  • siRNAの導入効率が低い
  • 細胞が死んでしまう
  • RNAi効果が得られない

【付録】

−自分にぴったりの遺伝子導入試薬が一目でわかる− 遺伝子導入試薬の性能別比較一覧

付録の使い方
遺伝子導入試薬一覧
試薬の補足情報
  • 参考資料・文献
  • 導入実積のある細胞(株)名
  • 遺伝子導入試薬(主にリポソーム)の組成比較表
  • 各試薬メーカーのURL
細胞(株)名から検索する試薬番号の索引

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