細胞培養入門ノート

第１日
◆培養室の見学
　　　　　●まず前室へ入る
　　　　　●無菌室へ入る
◆実習１　培地替え
step1 前室での準備
step2 無菌室へ入る
step3 クリーンベンチの用意
step4 必要なものをクリーンベンチへ入れる
step5 細胞を出す
step6 ディッシュの観察
step7 培地替えのために培地を吸い取る
step8 培地を加える
step9 ディッシュを収納する
step10 あとしまつ

第２日
◆実習１　細胞の継代
step1 前準備
step2 無菌室へ入る
step3 細胞を出す
step4 継代する
◆実習２　細胞数を数える
実習２-１ 裸核にして細胞数を数える
step1 核浮遊液の調整
step2 細胞数の数え方
実習２-２ 裸核にしないで数える
　　　　　●浮遊細胞をそのまま数える
　　　　　●生細胞を数える
実習２-３ ディッシュに生えている細胞を数える

第３日
◆実習１　細胞浮遊液の正確な分注
　　　　　●分注のしかた
step1 細胞浮遊液を作り，分注する
step2 細胞を数える
◆実習２　少数細胞のまき込み（コロニー形成）
◆実習３　コロニーのギムザ染色
step1 固定
step2 染色
step3 観察

第４日
◆実習１　マルチウェルプレートにまく
step1 カバーグラスをマルチウェルプレートに入れる
step2 細胞をまき込む
◆実習２　細胞のクローニング

第５日
◆実習１　増殖曲線を描く
　　　　　●ケース1：ちょっといやみかもしれないが，優等生的な一例
　　　　　●ケース2：ありそうな，でも困った一例
◆実習２　応用実習
　　　　　●カバーグラスにまき込んだ細胞の扱い
実習２-１ DNAの染色
実習２-２ 抗体染色
実習２-３ 放射性同位元素で標識する

共通実習
◆実習１　培養室の掃除
◆実習２　オートクレーブ
◆実習３　乾熱滅菌
◆実習４　濾過滅菌
　　　　　●数10 mlまでの濾過
　　　　　●数百mlから数L程度の濾過
　　　　　●大量の溶液（100 mlから10 Lまで）の濾過
◆実習５　ガラスピペットの洗浄と滅菌
step1 ピペットの洗浄
step2 ピペットの準備
step3 乾熱滅菌
◆実習６　インキュベーターの掃除
◆実習７　培地を作る
◆実習８　トリプシン/EDTAを作る
◆実習９　血清を非動化する
◆実習10　細胞を凍結保存する
◆実習11　細胞を凍結から出す
◆実習12　マイコプラズマの検出
　　　　　●共通実習を通じて

付録：書き込み式プロトコール