クローズアップ実験法

2025年9月号 Vol.43 No.14 詳細ページ
新規DNAエレメント“TAx9”によるCre-loxP生物のワン・ステップ作出法
Martin Miguel Casco-Robles，千葉親文
385 新規DNAエレメント“TAx9” によるCre生物の ワン・ステップ作出法 Martin Miguel Casco-Robles,千葉親文 何ができるようになった? 新規 DNA エレメント“TAx9”の発見により Cre- 一体型ベクターの作製が可能になった.こ れにより,これまで多大な経費と時間,労力が必要であった Cre- 生物の作出がワン・ステップ でできるようになった. 必要な機器・試薬・テクニックは? プラスミド DNA 合成時に使用される標準的な機器・試薬・テクニック.ただし,大腸菌 ( )は NEB Stable Competent はじめに Cre- (High Efficiency)を使用する(詳細は後述). とによって得られる.しかし,これには多大な経費と システムをゲノムに導入した生物(Cre- 生物)は,生命科学のさまざまな分野で,体内で 時間,労力を要する.もし, 両方を含む単一のベクター(Cre- 遺伝子と flox 領域の 一体型ベクター) の遺伝子の働きや細胞の動態を調べるために使用され が作製できれば,これを受精卵のゲノムに組み込むこ ている.DNA 組換え酵素である Cre は, とで,Cre- とよばれ 生物がワン・ステップで作出できるは る 34 塩基対の DNA 配列に結合し,部位特異的組換え ずである.しかし,これは実際には困難である.なぜ を引き起こす.例えば,ゲノム内の特定の D N A 配列 なら,ベクターを合成するために用いる大腸菌のなか を 2 つの で, で挟むと, の向きにより,Cre はそ 遺伝子が自発的に発現し,flox 領域に組換えが の配列を除去(ノックアウト)したり ,反転させたり 起こってしまうからである 1)2).この自発的な Cre 発現 することができる. や flox 領域の組換えは, Cre- 遺伝子を発現させるため 生物は一般に,ある特定の条件(組織特異 に用いるプロモーターを真核生物の組織特異的プロモー 的プロモーターの活性化など)で Cre が発現するよう ターにしたり,Cre を CreER などの誘導型 Cre(通常 に設計した Cre 系統の個体と,2 つの は不活性状態)にしたりしても抑制できない 1)2). で挟まれた D NA 配列(以下 ,fl o x 領域とよぶ)をゲノムにもつ 系統の個体を別々に作出し,それらを交配するこ Creintegrated vector production technology by TAx9 enabling one-step creation of Creorganisms Martin Miguel Casco-Robles/Chikafumi Chiba:Institute of Life and Environmental Sciences, University of Tsukuba(筑 波大学生命環境系) 2270 実験医学 Vol. 43 No. 14(9 月号)2025
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