「実験医学」で大好評の連載「クローズアップ実験法」がついに単行本化しました.つねに役立つ最新テクニックを第一線の研究者によって紹介してきた本連載.その1999年から2001年掲載分までに一部加筆修正を加え,さらに新原稿を加えて便利な一冊にまとめました.遺伝子クローニングからタンパク質機能解析,培養法など幅広く網羅しており,まだ実験を覚えたてで,遺伝子クローニングからはじめたいという方から,バリバリの研究者で,先端のゲノムテクノロジーを活用して研究をもっと加速させたいと考えている方まで,本書をお役立ていただければ幸いです.
第1章 遺伝子のクローニング・スクリーニング技術と発現解析
・核輸送トラップ法による核移行タンパク質遺伝子のスクリーニング
・恒常的活性型受容体とレトロウイルスを組合せた
Signal Sequence Trap法
・タンパク質の細胞内局在によって遺伝子を同定するFL-REX法
・高速リアルタイム遺伝子定量法
・マイクロアレイを用いた遺伝子発現量解析
・Serial Analysis of Gene Expression(SAGE)法による
・遺伝子発現の全体像の解析−数千から数万種類の遺伝子の同定と定量
第2章 細胞・生体レベルの遺伝子機能解析
・培養細胞における新しい遺伝子ノックアウト法
・ワンデイミュータジェネシス−短時間で確実にできる遺伝子変異導入法
・dsRNAを用いたショウジョウバエ(Drosophila)胚における
遺伝子発現阻害
・DT40細胞株で致死的変異を導入した
コンディショナルミュータントをつくる
・リボザイムを用いた効率のよい遺伝子ノックアウト法
・トランスジェニックカエルの作製方法
・精巣へのDNA直接注入による初期胚・胎仔および個体への遺伝子導入
第3章 タンパク質の同定・検出
・質量分析計を用いたプロテオーム解析
・細胞内サイトカイン染色法−4カラーフローサイトメトリーを用いた
特異的メモリーCD4+T細胞の検出
・ファージ提示法を用いたモノクローナル抗体作製法
・リン酸化部位特異的抗ペプチド抗体を用いた
基質特異的キナーゼの新規発現クローニング法
・抗体の代わりにアプタマーを用いる分析法
・ファージλNタンパク質によるアンチターミネーションを利用した
細胞内RNA-ポリペプチド相互作用検出系
第4章 タンパク質間相互作用解析
・酵母two-hybridシステムを用いた酵素特異的基質の同定法
・酵母tri-hybrid法によるチロシンキナーゼ情報伝達系の解析
・FRETしませんか?
・β-ガラクトシダーゼを用いたPCA法による
細胞内におけるタンパク質間相互作用の検出
・Biacoreを用いた低アフィニティー相互作用の検出
第5章 イメージング・可視化技術
・「Rx-FISH」による染色体解析
・生細胞蛍光イメージング
・発生期の脳における神経細胞移動の可視化
・生細胞におけるクロマチンの可視化
第6章 細胞の単離と培養法
・神経上皮細胞の単離と培養法
・ラットオリゴデンドロサイト前駆細胞の単離法
・ES細胞の分化誘導系を用いた遺伝子機能解析の戦略
第7章 環境ホルモンのスクリーニングと測定法
・メダカを利用した環境ホルモン・バイオアッセイの開発
・表面プラズモン共鳴センサーを用いた
内分泌かく乱化学物質スクリーニング法
・B細胞ターゲティング法を用いた環境ホルモンに対する
新規モノクローナル抗体の作製
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(2021年8月23日)
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