タンパク質実験ハンドブック

第1章　タンパク質研究ストラテジー

第2章　タンパク質精製法

1．タンパク質精製を始める前に【朴 宣奏】

2．精製の進め方【朴 宣奏】

3．タンパク質の抽出と分画【朴 宣奏】

4．カラムクロマトグラフィーによる精製

• イオン交換クロマトグラフィー【濱口有知子】
• ゲル濾過クロマトグラフィー【濱口有知子】
• 疎水性クロマトグラフィー【朴 宣奏】
• アフィニティークロマトグラフィー【中平和子】

第3章　タンパク質の分離と同定

1．はじめに【長野光司】

2．SDS電気泳動法（SDS-PAGE）によるタンパク質の分離【布村一人／長野光司】

3．目的タンパク質のゲル内プロテアーゼ消化と生成ペプチドの回収【岡村信子／長野光司】

4．MALDI-TOF MSによるペプチド質量の測定およびデータベース検索による目的タンパク質の同定【長野光司】

5．LC-MS/MSによるペプチド質量の測定およびデータベース検索による目的タンパク質の同定【板垣千春／泉 友則】

第4章　抗体作製と精製

1．免疫動物の選択と免疫【深見希代子】

2．ポリクローナル抗体の作製【中村由和】

3．モノクローナル抗体の作製【深見希代子】

4．ファージディスプレイを用いたモノクローナル抗体の作製【深見希代子】

5．ペプチド抗体の作製と応用【澤 真理子】

6．抗体の精製【古谷昌広】

第5章　リン酸化部位の同定と利用

1．リン酸化アミノ酸分析【朴 宣奏】

2．リン酸化部位の同定【朴 宣奏】

3．リン酸化ペプチド抗体の作製と応用【末次志郎】

4．抗リン酸化チロシン・セリン・スレオニン抗体を用いたイムノブロッティング【坂西義史】

5．リン酸化部位変異体（mimic）の導入と応用【末次志郎】

第6章　発現タンパク質の作製と利用

1．大腸菌によるタンパク質の発現と精製【中西 修】

2．バキュロウイルスによるタンパク質の発現と精製【加藤真良】

3．融合タンパク質の発現と精製（FLAG-tag myc-tag）【横田達也】

4．ランダムinsertion/deletion変異法を用いた変異タンパク質の作製【伊藤俊樹】

第7章　タンパク質の検出

1．ウエスタンブロット法【神谷美智子】

2．抗体による免疫染色【山崎大輔】

3．in situ hybridization法【澤 真理子】

4．ノーザンブロット法【鈴木美奈子】

5．内在性タンパク質の細胞内局在の観察（蛍光抗体染色）【佐々木信成】

第8章　動物細胞でのタンパク質の発現と応用

1．プラスミドを用いた一過的な発現【及川 司】

2．安定形質発現株の作製法【栗栖修作】

3．レトロウイルスベクターを用いた発現【山口英樹】

4．アデノウイルスベクターを用いた発現【小池大輔】

5．マイクロインジェクション【水谷清人】

6．タンパク質の導入（protein transfection）【伊集院 壮】

7．蛍光タンパク質の構築，発現と生細胞での解析【加藤真良】

8．GFP-PLCδ1-PH，GFP-Akt-PHによるイノシトールリン脂質の局在観察【伊集院 壮】

9．直接標識したタンパク質の導入と観察【末次志郎】

10．FRET【山口英樹】

11．BRET【山口英樹】

12．FACSを用いた発現細胞のsorting【竹中 圭】

13．siRNA導入による遺伝子発現阻害【坂西義史】

第9章　タンパク質間相互作用分析とタンパク質性質の解析

1．免疫沈降法【船戸洋佑】

2．融合タンパク質を用いた結合タンパク質の探索【水谷清人】

3．酵母two-hybrid法【小池大輔】

4．酵母three-hybrid法【伊藤俊樹】

5．in vivoタンパク質間相互作用検出法【伊藤俊樹】

6．プロテインマイクロアレイ解析【長野光司】

7．BIACOREによるタンパク質相互作用の解析【末次志郎】

8．タンパク質とlipidとの相互作用解析【辻田和也】

9．タンパク質と核酸の相互作用の解析（ゲルシフト法）【竹中 圭】

10．アクティビティーゲル法【伊藤俊樹】