めざせ実験の達人-トラブル回避のコツと最新キットで極める!
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めざせウエスタンブロッティングの達人
Question

Q2. 転写されていないようです…

Answer
A.電源や電極の向きを確認してみよう
電源のプラス極,マイナス極を反対にしてしまうと,当然タンパク質はゲルからメンブレンの反対側に移動する.メンブレンとは反対側のろ紙に色素付きマーカーが転写されていないか確認する.
A.ゲルとメンブレン,ろ紙のサンドイッチの順序を確認してみよう
電源のプラス極,マイナス極が正しくても,ゲルとメンブレンの順番を間違うと当然反対に移動してしまう.この場合も,メンブレンとは反対側のろ紙に色素付きマーカーが転写されていないか確認する.
A.メンブレンの保護用のサポート材を一緒に挟んでいないか確認しよう
初心者ではよく発生する間違い.なかには,メンブレンを捨てて保護用のサポート材が本物と思って実験をしてしまった例もある.なおこのような場合,電流が流れず通電トラブルで気が付くことが多い.
A.転写の際の電流値を目的のタンパク質にあわせて変更してみよう
低分子量のタンパク質の場合は,転写条件が強いとメンブレンを抜けてしまうことがある.反対に高分子量のタンパク質の場合は,転写条件が弱いとゲルから抜けにくく,転写されにくい.

転写されてる?ウエスタンブロッティングのQ&A一覧へQ3 転写ムラ

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プロフィール

森山先生
森山 達哉(Tatsuya Moriyama)
京都大学農学部食品工学科卒.同大学院農学研究科修士課程,博士課程ののち,京都大学食糧科学研究所助手 等を経て2005年に近畿大学農学部講師,2008年准教授.その間,1996年米国スタンフォード大学招聘研究員(1年間).毎日多くの元気な学生たちと一緒に,食品成分の生理機能性(特に脂質代謝への影響)と安全性(特にアレルゲン性)に関する研究を行っている.基礎研究だけでなく,社会の役に立つ「アウトプット」を意識した研究を進めています.
<著作>
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