クローズアップ実験法

2025年6月号 Vol.43 No.9 詳細ページ
オルガネラ集団を俯瞰する「オルガネラランドスケープ解析法」
小山-本田郁子，栗川義峻，水島　昇
382 オルガネラ集団を俯瞰する 「オルガネラランドスケープ 解析法」 小山 - 本田郁子,栗川義峻,水島 昇 何ができるようになった? 古典的なオルガネラ解析法はパラメータ数や分離能に課題があった.われわれは,多色オルガネラ 粒子測定によってパラメータ数と分離能を格段に高めたことで,多種のオルガネラの全体像を一度に 把握するオルガネラランドスケープ解析を実現した. 必要な機器・試薬・テクニックは? オルガネラ 1 粒子に安定して存在するマーカー分子を複数種選択し,それぞれ蛍光標識をすること が必要である.多色蛍光オルガネラ粒子の検出には,蛍光スペクトルイメージングが可能な共焦点顕 微鏡(フローサイトメーターでも代用可能)を使用する. はじめに ガネラを細胞から取り出して粒子として 1 個ずつ測定 オルガネラは,分裂や融合,オルガネラ同士の接触, 成熟や分化,リサイクルなどの過程を含むとてもヘテ 1) ロな集団である .また ,オルガネラのマイナーな成 することで分離能を高め,また多色標識することで複 数種のオルガネラを一挙に眺めるランドスケープ解析 を試みた.その方法をここに紹介する. 分や中間体などが細胞の機能に影響することも知られ ている 2).しかし ,そのようなヘテロな細胞内オルガ ネラの存在状態から細胞の状態を理解するためには , 原理 個々のオルガネラを集団として,包括的かつ直感的に オルガネラランドスケープ解析法のベースとなるオ 捉える解析手法が必要である.細胞内オルガネラの全 ルガネラ情報の取得は,多色オルガネラ単粒子計測で 体像を簡便かつ直感的に捉えるためには,複数種のオ 行う.これは,細胞を破砕してオルガネラを粒子化し ルガネラを同時に解析することが有効である.しかし, て蛍光標識し,蛍光スペクトルイメージングで測定す 現在一般的に使われている手法,例えば蛍光顕微鏡法 る方法である.さらに,得られた多次元情報を次元削 や,免疫沈降法,細胞分画法では,一度に解析できる 減法で可視化することで ,オルガネラ集団の分布図 , オルガネラの種類が少ない,あるいは分離能が低いた すなわちオルガネラランドスケープを得ることができ め,困難である(図 1).そこでわれわれは最近,オル る(図 1) .われわれは現在のところ,8 色までの蛍光 Organelle landscape analysis: visualizing organelle populations at a glance Ikuko Koyama-Honda/Yoshitaka Kurikawa/Noboru Mizushima:Graduate School of Medicine, The University of Tokyo (東京大学大学院医学系研究科) 実験医学 Vol. 43 No. 9(6 月号)2025 1427
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