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Q15. どんな染色法を選んだらいいかわかりません…
- A．解析の目的から逆算して染色法を選ぼう
- 染色法には一長一短が存在するが，主に検出感度，その後の解析が選択の決め手になる（表）．実験の目的をよく考える必要がある．
| 染色方法 | 目的・用途・特徴 | 検出機器 | 検出感度 | その後の解析 |
|---|---|---|---|---|
| 通常のCBB染色（CBB-R250またはR350） | 通常の染色 メタノールや酢酸を使う |
肉眼 可視スキャナ |
普通 | 質量分析やin-gel消化可能（できるだけ脱色する方が望ましい） |
| 非溶媒系CBB染色（CBB-G250） | 通常の染色でメタノールや酢酸を使わない場合 廃液処理が容易 ゲルの収縮が少ない 色調はやや薄い |
肉眼 可視スキャナ |
普通 | 質量分析やin-gel消化可能（できるだけ脱色する方が望ましい） |
| 銀染色（シンプル法） | 高感度検出 （タンパク質によっては染まりにくいものがある） |
肉眼 可視スキャナ |
高感度 | 脱色可能 |
| 銀染色（通常法） | 高感度検出 糖タンパク質や等電点ゲルの染色も可能 2D-PAGEに適す |
肉眼 可視スキャナ |
高感度 | 脱色可能 |
| 銀染色（MSコンパチブル法） | 高感度で質量分析などによる同定 2D-PAGEに適す |
肉眼 可視スキャナ |
高感度 | 質量分析可能 |
| 蛍光染色 （SYPRO Ruby， Deep Purple， Flamingo， Orioleなど） |
高感度で質量分析などによる同定 2D-PAGEに適す |
蛍光スキャナ トランスイルミネータ CCDイメージャー （試薬によって適切な検出機器を選ぶ） |
高感度 | 質量分析やin-gel消化可能 |
| ネガティブ染色 | タンパク質に影響を与えたくない場合（タンパク質ではなくゲルの方が染まる） ゲルが染まる ウエスタンブロッティングを行いたい場合 |
肉眼 可視スキャナ （黒い紙の上に置いて透明のバンドを検出） |
普通 ～高感度 |
質量分析やin-gel消化可能 脱色可能 活性染色可能 ウエスタンブロッティング可能 |
※ SYPRO Rubyはタカラバイオ社，ライフテクノロジーズ社の製品．Deep PurpleはGEヘルスケア社の製品．Flamingo，Orioleはバイオラッド社の製品．
タンパク質染色の概要定量と染色のQ&A一覧へQ16 染まらないCBB
プロフィール
- 森山 達哉（Tatsuya Moriyama）
- 京都大学農学部食品工学科卒．同大学院農学研究科修士課程，博士課程ののち，京都大学食糧科学研究所助手 等を経て2005年に近畿大学農学部講師，2008年准教授．その間，1996年米国スタンフォード大学招聘研究員（１年間）．毎日多くの元気な学生たちと一緒に，食品成分の生理機能性（特に脂質代謝への影響）と安全性（特にアレルゲン性）に関する研究を行っている．基礎研究だけでなく，社会の役に立つ「アウトプット」を意識した研究を進めています．
- ＜著作＞
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- 『バイオ実験で失敗しない！ タンパク質精製と取扱いのコツ』（羊土社，2007）
- 『バイオ実験で失敗しない！ 検出と定量のコツ』（羊土社，2005）
