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Q18. 長く現像しても，バンドもメンブレンのバックグラウンドも全く何も見えません…
- A．検出試薬を確認しよう
- ２液混合タイプの場合，保存液が混ざってしまうと感度が低下する．また，保存液が古くても感度が低下する．
- A．二次抗体を確認しよう
- 二次抗体の標識酵素が失活していると検出できない．二次抗体のみを段階希釈しニトロセルロース膜にドットブロットし，検出してみる．シグナルが発生しない場合，標識酵素が失活している．
- A．二次抗体を濃くしてみよう
- 二次抗体が薄すぎると検出できない．また，特に二次抗体を希釈して保管している場合，失活することもあるので，その場合は原液からつくり直す．
- A．一次抗体と二次抗体の組合わせを確認しよう
- 一次抗体の動物種と二次抗体の反応種特異性が一致していないと，当然検出できない．抗マウス抗体と抗ラビット抗体の間違いは初心者には多い．
- A．現像液が古い可能性があるのでつくり直そう
- X線フィルムで現像して検出する場合，現像液のトラブルはかなり多い．古いと液が黒くなり，検出できない．ここぞという大事な実験の場合は現像液を新調した方がよい
- A．冷却CCDカメラタイプのイメージャーの設定（特に蛍光検出用のフィルターを付けていないか）を確認しよう
- 冷却CCDカメラタイプのイメージャーで化学発光を検出する際，通常フィルターは不要．フィルターがあると微弱な光の検出効率が著しく低下する．
Q17 検出手法比較ウエスタンブロッティングのQ&A一覧へQ19 バンドがない
プロフィール
- 森山 達哉（Tatsuya Moriyama）
- 京都大学農学部食品工学科卒．同大学院農学研究科修士課程，博士課程ののち，京都大学食糧科学研究所助手 等を経て2005年に近畿大学農学部講師，2008年准教授．その間，1996年米国スタンフォード大学招聘研究員（１年間）．毎日多くの元気な学生たちと一緒に，食品成分の生理機能性（特に脂質代謝への影響）と安全性（特にアレルゲン性）に関する研究を行っている．基礎研究だけでなく，社会の役に立つ「アウトプット」を意識した研究を進めています．
- ＜著作＞
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- 『バイオ実験で失敗しない！ タンパク質精製と取扱いのコツ』（羊土社，2007）
- 『バイオ実験で失敗しない！ 検出と定量のコツ』（羊土社，2005）
